产品货号:
JN5090
中文名称:
Bst2.0 DNA聚合酶(无甘油)
英文名称:
Bst2.0 DNA Polymerase(Glycerol-Free)
产品规格:
1600U|8000U
发货周期:
1~3天
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本制品是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的同源物,来源于E.coli菌株。利用基因重组技术,在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。该酶具有5'→3'DNA聚合酶活性,但缺乏5'→3'外切核酸酶活性。与野生型BST DNA聚合酶大片段相比,Bst 2.0 DNA聚合酶表现出更高的扩增速度、产量和灵敏度。本制品不包含甘油等影响冻干工艺的成分,可用于冻干反应体系的配制和产品设计。
- 富含GC序列的DNA序列测定;
- 微量(纳克量)DNA模板的快速测序;
- 随机引物DNA标记;
- 双链DNA 5'突出端补平法标记;
- 可用于等温DNA扩增,如环介导等温扩增(LAMP),全基因组扩增(WGA),解旋酶恒温基因扩增(HDA)等。
组分 | 1600U | 8000U |
Bst2.0 DNA聚合酶(无甘油,8U/μL) | 200μL | 1mL |
10×Bst 2.0 Buffer with Mg2+ | 1mL | 1mL×5 |
100mM MgSO4 | 500μL | 1.25mL×2 |
保存:-20℃
65℃条件下,30分钟内将25nmol的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。
qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶和RNase污染。
- 建议试剂预混、模板添加和检测三项尽可能在不同空间操作,避免试剂等污染,影响后续实验;
- 反应受Mg2+或酶影响较大,如反应结果不理想,可优先调整Mg2+终浓度为10mM进行实验。必要时,可调整反应体系中Mg2+终浓度为6~12mM或Bst2.0 DNA聚合酶活性为0.16~0.64U/μL活性,以达到最佳效果。本制品提供的反应缓冲液包含40mM Mg2+
;
- 可同时设计2~3组引物,选择最好的一组进行实验;
- 反应中可添加Eva Green等荧光染料进行实时检测;
- 反应结束后,如进行开盖操作,务必先进行热失活再开盖检测。
- 在冰上预混以下试剂:
成分 用量 终浓度 10×Bst 2.0 Buffer with Mg2+ 2μL 1× 100mM MgSO4 0.8μL 4mM dNTPs(10mM each) 2.8μL 1.4mM 10×Primer 2μL 1× Bst2.0 DNA聚合酶(8U/μL) 0.8μL 0.32U/μL 模板 X μL ≥10fg Nuclease-free Water 至20μL - - 体系中Mg2+终浓度为8mM;
- 10×Primer包含2μM F3/B3,16μM FIP/BIP和4μM LF/LB(添加环引物可以明显缩短反应时间)。
- 体系中Mg2+终浓度为8mM;
- 60~65℃反应30~60min。
- 热失活条件:80℃反应10min。
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